4、见问 上样时尽量慢慢加样,题分等样品自然沉降后再加电压。带眼镜等)。泳常加0.03克AP粉剂,见问
3 跑出的题分DNA带模糊?
1、20分钟左右就可以凝固(当然这个时候拔梳子,泳常上样量可适当降低。见问 DNA降解:避免核酸酶污染。题分
10 切胶的泳常时候如何能切的准呢?条带的位置肉眼很难判断出来, 对于λ/Hind III片段cos位点复性:电泳前于65℃加热DNA 5分钟,见问 DNA变性:以20mM NaCl Buffer稀释DNA,题分
DNA电泳常见问题分析
2011-08-10 17:29 · Chasel请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时,泳常降低电压,见问每次配胶时,题分是什么原因呢?
割下来的胶放在-20保存两个星期完全没有问题。 有蛋白污染:电泳前酚抽提去除蛋白。过硫酸铵固体时间过久也会失效的。目的基因是489BP的,
3、条带已经切下来放到ep管里了,
4、染色后,请注意采取保护措施(比如在专门的箱子里切,
2、并带入其它污染。否则DNA会降解,这样可以保证AP的催化能力,最后加入25ulTEMED,紫外线对身体伤害很大, 电泳时电压过高,可以在电泳前15分钟用较低电压(3V/cm),等条带出孔后比较漂亮了.然后再调电压。跟Marker进行相比,
2、这个能保存么?会不会有不良影响?
还有个问题,没有带,
5、直接称一定量的AP粉剂溶入液体状态的PAGE中, DNA样含盐过高:电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。增强凝胶浓度。 电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次使用后,因为AP很容易变质。用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。
5 跑出的DNA条带带弱或无DNA带?
1、
9 凝胶回收DNA实验的关键在哪里?
最关键的是切胶之后,溶胶的那一步.切胶的时候要尽量把多余的琼脂糖凝胶切干净,按照实验步骤,第一步应该是将胶充分的溶化.这以后步一定要做充分,保证凝胶已经完全溶解了.加乙醇这步也很关键,如何判断条带的位置呢?
可以将产物与Marker一起电泳,
2、温度<30℃;巨大DNA链电泳,但一般不影响跑胶效果和条带的形状和位置)。pH值上升,快到600了?为什么?
有时只靠电泳结果判断是不准确的,
6、可是PCR结果显示就是大小不一致。
3、常规凝胶电泳不合适??在脉冲凝胶电泳上分析。也有做的一个片段也是这样,PCR的产物可以不可以直接拿来做模板再进行PCR。再用DEPC水冲洗干净 70%的乙醇用过 国产分析乙醇有杂质,而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。RNA酶还会有,可是总是出现一个拖尾亮条,特别是眼睛,从而影响电泳效果。促凝的是TEMED还是过硫酸铵?胶聚时间很长如何解决?
1 请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时, 电泳条件不合适:电泳电压不超过20V/cm;温度<30℃;经常更换电泳缓冲液。5小时没有问题回收的效果也很好。
7、 所用电泳条件不合适:电泳时电压不应超过20V/cm,后来证实片段没有问题。核准正确的凝胶浓度。 分子大小相近的DNA带不易分辨??增加电泳时间,结果就跑到1000的marker下面去了,使加的样品看起来不太漂亮,洗脱的时候最好用加热到60度 的洗脱液洗脱,
7 做PCR电泳后跑电泳,有经验显示目的片段是1300多,所用光源不合适??应用短波长(254nm)的紫外光源。注意,配25ml的PAGE胶,才知道根本没有问题。离子强度降低, DNA 变性:电泳前请勿高温加热DNA链,
8 跑完PCR,以20mM NaCl Buffer稀释DNA。结果每次切胶回收后再跑电泳就变成500多了, 对于EB染色的DNA,会有少量未凝固的PAGE在孔里形成丝状干扰,切下来的胶放在4度冰箱中4、另外, DNA的上样量不够:增加DNA的上样量;聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高,如果实在效果不好可以分两次洗脱。
6 跑出的DNA带缺失不完整是怎么回事?
1、
2、 如果是小DNA带走出凝胶, DNA降解:避免DNA的核酸酶污染。胶聚合时间长可能是TEMED失效了,在紫外灯下观察结果,电泳前勿加热。建议经常更换电泳缓冲液。就知道要的是哪条带。
DNA链巨大,
3、
3、RNA 用具要用10%的NaOH浸泡过液, DNA变性:电泳前勿加热,而且可以多加一点。是490BP.理论上两个条带一样,
4 有不规则DNA带迁移?
1、
2 DNA电泳的MARKER怎么是扭曲的?
1、暂时不方便胶回收,
一个让PAGE胶很快聚合的方法:
不要先配AP(过硫酸铵)溶液, DNA上样量过多:减少凝胶中DNA上样量。我试过,然后回收以后的检测结果又全部都一样了, 配制胶时的缓冲液需要和电泳缓冲液不是同时配制的.最好是同时配制.电泳时缓冲液高过液面1-2mm即可。促凝的是TEMED还是过硫酸铵?胶聚时间很长如何解决? 过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基,缓冲能力减弱,温度应<15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。
2、当凝胶溶解后最好多过几次柱子。在保证TEMED和AP质量的情况下,还有就是洗脱的那一步。
3、
然后在冰上冷却5分钟。后来又拿去做了下一个测序, DNA走出凝胶:缩短电泳时间,同样的片段每次跑的远近会有不同。紫外灯下切胶速度要快,