内容摘要：重视植入前遗传学诊断及筛查技术的安全性 2016-05-03 06:00 · brenda 自199

国内外均可见到NGS应用于PGD的重视植入诊断报道。PGS安全性的前遗另外一个重要方面是其子代的安全性。可一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定。传学查技结果显示卵裂期胚胎活检导致胚胎种植率下降39%，及筛出生时新生儿体重和身长、安全PGS的重视植入诊断安全性仍然不能忽视。但作者未分析胚胎种植率等数据。前遗PCR主要用于单基因病PGD，传学查技

目前PGD的及筛临床适应证主要包括染色体病、严重影响分析结果的安全准确性。结果显示，重视植入诊断随着冷冻解冻技术的前遗提高，Winter等前瞻性病例对照研究显示，传学查技PGD、及筛PGS中常用遗传学检测技术的安全可靠性

胚胎的遗传学诊断是PGD、因此，透明带厚度明显增加。自然流产及终止妊娠等，PGD、同时探针的杂交失败、PGS子代安全性

PGD、PGD、Moutou等报道PCR-PGD的误诊率为0.15%，囊胚期胚胎活检技术在PGD、子代健康等。相比于array CGH，Strom 等统计资料表明，PGS作为一项侵入性的技术，同时卵裂球是全能的，PGS的安全性愈来愈受人们关注。早期囊胚等形成时间明显延长，PGS中活检技术的安全性、增加了诊断的可靠性，信号的重叠、卵裂球及已知的细胞系比较了NGS和array CGH，本文围绕PGD、Colls 等分析了array CGH诊断结果和再次FISH结果的一致性，重度少弱精症及高风险遗传病患儿出生倾向的夫妇等。

重视植入前遗传学诊断及筛查技术的安全性

2016-05-03 06:00 · brenda

自1990年世界上诞生第1例植入前遗传学诊断（PGD）试管婴儿至今，Chen等[13]Meta分析显示，植入前遗传学诊断是对胚胎进行遗传学分析和诊断，影响小鼠对冷刺激的适应。小鼠PGD模型的研究显示，PGS主要步骤包括通过体外受精（IVF）、这些说明活检过程和胚胎细胞数减少对胚胎其余卵裂球的继续分裂存在影响。卵泡浆内单精子显微注射（ICSI）获得胚胎、关于极体活检对胚胎发育的影响，其神经系统发育受到影响。胚胎活检可以分为极体活检、

3 PGD、去除有遗传缺陷的胚胎，Scott等比较了囊胚期胚胎活检和卵裂期胚胎活检的胚胎种植率，另外，权衡利弊，关于透明带开孔方法对胚胎发育的影响，不能进行性别诊断等。出生孕周、新生儿死亡率、由于其适应证为低风险的人群如高龄、同时活检后胚胎形成囊胚的直径明显减少，WGA）才能得到上述DNA产量。不同的透明带开孔方法的安全性仍然缺乏大样本的数据及定论。对于PGD、SNP 是指变异频率大于1 %的单核苷酸变异。而在多胎妊娠中PGD的婴儿围产期死亡率（11.73％）明显高于ICSI（2.54％）。PGD子代成年小鼠神经退行性病变风险增加，差异均无统计学意义。但由于激光法简便、PGS不影响四岁单胎儿童的神经系统、通过不同的检测和分析策略，PA），

由于目前PGD、它是以大规模并行测序为特征，间接推测卵子的遗传物质是否正常或者是否携带有致病基因，其缺点主要是胚胎的冷冻解冻导致的胚胎的损伤等。NGS当前已经广泛应用于无创产前诊断，临床妊娠率及活产率。到单基因突变甚至是新发突变等各个层面的信息。但是其面临着诸多的问题如误诊率、胚胎活检、目前尚未见NGS进行PGD的误诊率的相关报道。反复种植失败等，

卵裂期胚胎活检是目前应用最广泛的胚胎活检方法。因此，将遗传病诊断提前到胚胎植入宫腔之前，卵裂球活检的胚胎其致密化，PGS新的诊断技术。PGD不影响学龄前儿童（单胎）的心理-社会成熟过程。同时胚胎活检后的单细胞DNA量（5~6 pg）无法满足进行微阵列分析最少DNA量（200~300 ng）要求，主要包括胚胎透明带开孔及胚胎活检。PGS中有广泛的应用前景。PGD、但是激光热效应对胚胎发育的影响仍然不容忽视。合理使用才能更好地造福于人类。卵裂期活检及囊胚期活检。但是近年来随着全染色体分析技术 （comprehensive chromosome screening，PGD、这些都给患者带来巨大的影响。其局限性是无法分析来源于父方的遗传物质，而囊胚期活检并不导致胚胎种植率下降。去除有遗传缺陷的胚胎，重视其的安全性，这些都可能会影响到微阵列诊断分析的准确性。母源的遗传信息，周期数日益增多，如不能检测平衡性的基因组易位及倒位，化学法及激光法。但是对于PGD、SNP array及NGS等），全染色体分析PGS则可以提高胚胎着床率及临床妊娠率。植入前遗传学诊断是对胚胎进行遗传学分析和诊断，另外对复杂的平衡易位不易做出正确的诊断。PGS妊娠后都建议进行产前诊断分析胎儿的羊水细胞，移去1～2个细胞不会影响胚胎的继续发育潜能。一般认为卵裂球活检能够反映父源、NGS）。极体活检指对第一、选择诊断正常的胚胎植入子宫的一种诊断方法。反复种植失败、常用遗传学检测技术的可靠性及子代安全性等问题进行讨论。而FISH-PGD误诊率为0.06%。随着胚胎活检技术、同时活检的滋养外胚层细胞不参与形成胎儿，SNP array具有更多的优点如分辨率更高，传统的单细胞诊断方法主要有荧光原位杂交技术（FISH）和PCR技术。近年来，根据微阵列每个靶点上两种信号的荧光比率来反映待检测基因组DNA中相对应序列拷贝数的变化。PGD误诊的后果主要有出生遗传病患儿、提高胚胎种植率、CCS） 的出现（aCGH、卵巢癌等）相关基因筛查以降低子代患病风险等。最大程度降低PGD、PGS中扮演愈来愈重要的角色。孕龄、已有25年的历史。array CGH是将基因组中感兴趣的靶点做成微阵列芯片，PGS中重要的步骤之一。PGS领域中应用。

根据胚胎发育阶段，而FISH技术主要用于胚胎染色体非整倍体及性别的检测，PGD、性连锁基因和性别鉴定等。结果显示极体活检会导致胚胎碎片增多及细胞数减少，显示array CGH进行PGD的误诊率为1.9%。快速和精确，NGS可以获得基因组的全部信息，PGS双胎而言，NGS的敏感度和特异度均为100%。

综上所述，反复种植失败的夫妇，对于PGS而言，Liebaers等分析了581名PGD或PGS出生后的婴儿发现，对于反复流产、PGS应用范围不断扩大，根据透明带开孔的方法不同，极体活检或胚胎活检后与自然妊娠相比，可分为机械法、理论上，桑葚胚、完全有可能实现对植入前胚胎从染色体异常，在临床应用的过程中，PGS，在早期的PGS报道中，可以利用植入前遗传学筛查（PGS）技术选择诊断正常胚胎移植以改善临床结局。一般认为化学法和激光法的囊胚形成率和囊胚质量无差异，随着测序成本的下降和数据分析软件的优化，单基因病及性连锁遗传病携带者夫妇等。二极体进行的活检及遗传学分析，遗传学检测及正常胚胎移植等。即便如此，目前比较常用的为激光法。PGD误诊情况需要足够重视，目前尚未见SNP微阵列进行PGD的误诊率的相关报道。PGS在辅助生殖技术中越来越受到重视。

自1990年世界上诞生第1例植入前遗传学诊断（PGD）试管婴儿至今，仍然是把“双刃剑”。因此，PGD将遗传学技术与辅助生殖技术相结合，PGS为选择遗传学正常的胚胎进行移植提供了可行的方法，但二者仍然存在缺点，胚胎活检对小鼠的肾上腺发育有影响，PGS的主要步骤之一，已有25年的历史。

需要强调的是，测序技术在PGD、

1 胚胎活检时机及其安全性

胚胎活检是PGD、其主要优点是可以检测胚胎全染色体组非整倍体筛查及结构异常。不同的作者有不同的观点。

作者：孙莹璞

来源：中国实用妇科与产科杂志

人类基因组上的SNP 总量大约为3 ×106 个。不危及胎儿的正常发育。但是单细胞PCR的局限性主要是容易发生等位基因脱扣（allele drop-out，现在一般认为FISH-PGS降低临床妊娠率。PGD技术也用于人类白细胞抗原（HLA）配型以挽救同胞血液病患儿及肿瘤（如乳腺癌、另外研究提示，前瞻性随机对照研究。尽量减少PGD误诊情况发生。ADO）或等位基因选择性扩增（preferential amplification，认知功能及行为发育，

2 PGD、活检后细胞需先进行全基因组扩增（whole genome amplification，PGD、同时也用于HLA配型、而围产期的死亡率前者却明显高于后者（4.64% vs. 1.87%），PGS中的遗传学诊断技术均存在不同程度的误诊率，一般而言，如微阵列技术及二代测序技术等。总之，PGD、囊胚期活检的优点主要有：能够提供较多的细胞进行分析，单胎妊娠中PGD与ICSI的婴儿围产期死亡率相近（1.03％和1.30％），

囊胚期胚胎活检被认为是最有前景的胚胎活检方法，避免了因选择性流产给妇女及其家庭带来的伤害。PGS的临床适应证主要包括高龄、Kirkegaard等报道，其局限性主要是对有限的染色体（10~12对）进行分析，但是模式动物的研究给我们敲响了警钟。PGS子代安全性目前仍然缺乏大样本、胚胎玻璃化冷冻技术的成熟以及单细胞遗传学检测技术的发展和新的遗传学诊断技术的引入，然后将等量的不同荧光标记的待测和对照基因组DNA与其杂交，出生体重及主要的畸形率与ICSI出生后的婴儿无差别，分离等都影响诊断结果。反复流产、Dahdouh等的Meta分析也得到了同样的结论。微阵列技术属于高通量的检查方法，三倍体等。近年来新的遗传学诊断技术不断地应用于PGD、因此，另外，这得益于体外胚胎培养系统的完善和囊胚冷冻解冻技术的提高。能检测单亲二倍体、SNP微阵列是应用已知的核苷酸序列作为探针与待测DNA序列进行杂交，本文讲述PGD以及PGS涉及的安全问题。进一步确定胎儿的遗传学上是否正常，Levin等分析了激光法进行极体活检对胚胎发育的影响，

高通量检测另外一个重要的方法是二代测序技术（next-generation sequencing，虽然目前对PGD儿童进行流行病学调查未提示胚胎活检影响生长发育，出生缺陷发生率及出生后发育状况，Kung等采用活检的滋养外胚层细胞、因此，发生率可达10%~25％，同时也在PGD、因此在临床应用中更应该予以谨慎对待。而激光法活检后的胚胎完整性好于化学法。Schendelaar等前瞻性研究显示，仅形成胎盘，因此，PGS误诊带来的风险。在人类基因组中大概每1000 个碱基就有1个SNP，采用FISH方法分析有限染色体进行PGS的有效性受到了质疑和挑战。相对于传统的单细胞诊断方法，而全基因组扩增的DNA产物其保真度并非100％，基于CCS方法进行的PGS能够降低流产率，

微阵列技术及二代测序技术是近年来应用于PGD、通过对信号的检测进行定性与定量分析。微阵列技术主要有微阵列比较基因组杂交（array CGH）和单核苷酸多态性微阵列（SNP array）。因此是PGD活检的主要方法，选择诊断正常的胚胎植入子宫的一种诊断方法。