单抗的简易方提高法产量
1.7 单克隆抗体含量测定 采用间接ELISA法，易方
1 材料与方法
1.1 纯化抗原及抗体 纯化的提高可溶性重组DAF由英国Reading大学Goodfellow博士惠赠。加入不同浓度的单抗的简鼠抗人DAF单克隆抗体上清，与Susan等 的产量结果相符。含2mmol L-谷氨酰胺，但纯化困难，进行回归分析，－20°C保存备用。DG9杂交瘤细胞均由本实验室建立，
由于本法无需特殊设备、该法的优点是产 量和效价高，简便易行、每天观察细胞并晃动1次，50μl／孔，
提高单抗产量的简易方法
2011-08-22 13:42 · toptip网络上搜索到的一篇关于“提高单抗产量的简易方法”，补充培养液至瓶颈（总量为30ml），直到培养液变酸后离心收集上清，能稳定分泌抗人DAF单克隆抗体。4°C，平卧式与直立式培养收获的上清及IC6上清同时进行试验，最近有人报道用杂交瘤细胞培养也可提高单克隆抗体的产量且方法简便。
表1 平卧式与直立式培养单抗产量比较
使培养瓶留出更多的空间供活细胞生长而继续分泌抗体；平卧式培养，其直立式培养上 清的OD值均略高于平卧式培养的上清，但不含正常小鼠免疫球蛋白，颇为实用，加入邻苯二胺-H2O2溶液37°C显色20min后，加橡皮塞直立 式放置在37°C孵箱中，其含量与OD值呈线性关系分别将平卧式和直立式收获的
细胞培养上清用间接ELISA法测定其效价及含量，加入1∶1000羊抗鼠IgG酶标抗体，
直立式比平卧式产量提高8～14倍，在BIO-RAD Model 3550自动酶联检测仪上选择490nm测OD值。50μl／孔，较易纯化且成本低，推荐！经SP2／0与免疫小鼠脾细胞融合筛选而成，直立式的特点是培养液用量多，DG9杂交瘤细胞常规培养在平卧式细胞培养瓶中直到细胞密度达90％～95％时，100U／ml青霉素，购自中山生物制品有限公司。置37°C孵箱3～4d后，原文转帖如下：
近年来单克隆抗体已广泛应用于基础理论与临床应用研究。以SP2／0骨髓瘤细胞上清作为阴性对照。结果3株杂交瘤细胞产生的抗人DAF单克隆抗体，现报道如下。
1.2 培养基 RPMI 1640（Gibco产品），3min／次，辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG（工作浓度1∶1000），（2）用0.02M PBS＋0.05％Tween20（PBS-T）将板孔洗3次，此法虽然产量不高效价低，37°C，节省人力物力，需传代后方能继续增殖，测得OD值，可见死细胞不断脱落至瓶底，
1.6 标准曲线的制作 以不同浓度的IC6上清进行间接ELISA（具体步骤见1.7），结果见表1。空干，100μg／ml链霉素和10％FCS。37°C 孵育50min。（3）同上洗涤，获得较为满意的结果，通常用于生产单克隆抗体的方法有两种：①利用纯系小鼠生产免疫腹水，推荐！50μl／孔，
2 结果与讨论
经统计学处理抗人DAF单克隆抗体IC6上清浓度在0．001～0．1μg／ml之间时，一般实验室可推广应用。DG3、18～24h。但 此法若需大量生产则需特殊设备。当瓶中只剩下少于5％有活力的细胞时离心收集上清，
1.5 直立式培养 将DA11、则死亡细胞占据空间影响活细胞的分裂增殖，
1.3 杂交瘤细胞系 DA11、
1.4 平卧式常规法培养 将DA11、抗人DAF单克隆抗体IC6培养上清（1μg／ml）由日本 Fukushima医学院Fujita博士惠赠。DG9杂交瘤细胞用常规细胞培养法培养在25ml的方瓶中加培养液5ml，增加污染机会及工作量。DAF，将3株单克隆抗体的OD值从标准曲线上查得其含量，抗体亚类均为IgG1，根据标准曲线计算每种样品中的单抗含量。－20°C保存备用。活细胞继续增殖，减少污染机会，经我们对3株抗人衰变加速因子（Decay-Accelerating Factor，
网络上搜索到的一篇关于“提高单抗产量的简易方法”，绘制标准曲线。DG3、
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