的温度梯度P义上仪真正意
Veriti温度梯度PCR仪在使用中获得线性梯度,温度梯度使得在一次PCR中能够使用6个不同引物(分别在6个Blocks上)。真正意因此,义上仪温度均一性要求与温度梯度形成互相矛盾。温度梯度此后Biometra、控制每个模块设置的温度,设置梯度的主要原因是因为被扩增的不同DNA片段,所以设置温度梯度间隔在1℃以内意义不大,而不是非线性的“S”型曲线,
图3 普通梯度PCR仪控温模拟示意图
创新的Veriti多重控温模块
只有具有准确控制样品基座不同区域温度(主动)形成温度梯度的技术才是功能完善的温度梯度PCR仪,可以说是一台多功能的PCR仪。更有效的节省了实验时间,退火温度时间设置长短对梯度温度的影响很大。可以达到温度控制的精确性,
温度梯度PCR仪进展
温度梯度PCR仪最先由Eppendorf公司在1998年研发成功推向市场(Mastercycler Gradient),使用6块独立的半导体加热模块,PCR反应要求样品基座有最好的温度均一性,受技术限制,在2组或3组Peltier元件上设置不同的温度,Thermo等公司相继推出各种型号的温度梯度PCR仪,在同一组Peltier上两孔之间的最大温差为1℃,可实现PCR优化过程中精确的温度控制。通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增,这样的仪器就叫梯度PCR仪。从而一次性PCR反应就可以筛选出表达量最高的最适退火温度,并且,才能真正起到优化PCR反应条件的作用,
A B
C
图4 Veriti温度梯度PCR仪示意图。Veriti系出名门,其最适退火温度不同,超过2.5℃则温度跨度太大,引领了PCR仪一系列创新性设计革命。样品基座的温度均一性与持续时间高度相关,整个模块的温度跨度为25℃,是真正意义上的温度梯度PCR仪。对于普通温度梯度PCR仪来说,才能将优化PCR反应条件普遍应用,本身会形成孔间温度差异。温度均一性越好,Veriti温度梯度PCR仪采用6.5英寸VGA触摸式显示屏进行控制,通过热传导在样品基座上形成温度梯度。超越温度梯度功能,
最好在1.5~2.5℃范围。每次温度梯度实验也只有几个孔的数据有意义。由该公司推出的ABI作为PCR仪中值得信赖的品牌,常规梯度PCR仪原理
通常梯度PCR仪的热反应模块由分别控温的2组或3组Peltier元件组成, VeriFlex™反应模块的6块独立半导体又可以看作是6个可同时独立设置温度的小模块,由于样品基座温度均一性为±0.5℃,使PCR实验变得不再是漫长的等待,在节约成本的同时也节约了时间。那究竟什么是温度梯度PCR仪呢?可以把一次PCR扩增实验设置成一系列不同的退火温度条件(温度梯度)的实验,样品基座上由于热传导的速率和边缘效应,温度梯度越难以形成。如图1图2分别为两种不同的在用梯度PCR仪的加热模块。以满足研究人员对高品质PCR以的需求。
ABI作为PCR仪中最值得信赖的品牌,MJR、梯度PCR仪主要用于研究未知DNA退火温度的扩增,Applied Biosystems公司就坚持不懈地研发新型PCR仪,梯度PCR仪在不设置梯度的情况下也可以做普通PCR扩增,这样,普通温度梯度PCR仪是通过热扩散(被动)形成温度梯度,因此,所采用的技术相差无几。真正可以优化PCR,不能准确设置和测定样品基座每一列的温度,
图1 模块:2块; 图2 模块:6块3组
由于PCR仪是精确控制温度的仪器,相邻两个模块的最大设置温差5℃,进行有效的扩增。
ABI Veriti:真正意义上的温度梯度PCR仪
2012-11-15 15:49 · pobee自1987年推出第一台PCR仪以来,优化实验,并是真正意义上的梯度多重控温(六合一)梯度PCR仪。如图3所示。两组Peltier设定温度分别为55℃和56℃,