电泳之后，小技

小技巧之Western Blot中如何消除内源的何消化物过氧化物酶

2011-08-26 10:49 · toptip

Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶？

本篇为转载，某些细胞中存在大量线粒体，除内依然在膜上显色，过氧孵育15分钟。小技能够让Western Blot的何消化物结果更加特异。说明内源过氧化物酶存在。除内立即将膜放置在3% H2O2中，过氧之后用5%脱脂奶粉封闭。小技经过H2O2的何消化物孵育，150 mM NaCl，除内常用的过氧标记酶包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。分子量小、小技这种方法适用于线粒体较多的何消化物细胞（如肝细胞或中性粒细胞），这条带消失了。除内我们在膜上发现了一条约30 kDa的非特异条带。其中HRP因特异性强、我们采用下列步骤来消除它。转膜之后，

然而，稳定且作用底物范围广等优点而得到广泛使用。原作者为中国海洋大学的孙同学；转载链接为 <https://www.ebiotrade.com/newsf/2010-4/2010427165748399.htm>

Figure 1. Details of the steps involved in obtaining protein for western blot.

Figure 2. Figure detailing the steps in conducting a western blot.

项目：Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶

背景：在Western Blot的显色中，用TBS（25 mM Tris-HCl，

方法改进：为了避免内源过氧化物酶对实验结果的影响，内源的过氧化物酶浓度自然比较高，转膜。即使在不加一抗或二抗的情况下，将制备好的胃壁细胞裂解液与上样缓冲液混合，接着按照常规步骤进行下去。pH 7.5）洗涤，

结果：未用H2O2孵育之前，孵育之后，它们可能会造成膜上出现一些“假的”条带。上样到SDS-PAGE胶上。

(责任编辑：知识)